Identificação molecular de isolado fúngico ambiental produtor de lipase

Abstract

A busca por microrganismos produtores de biomoléculas de interesse comercial tem aumentado, visto que as questões do cunho ecológico e renovável tem se intensificado. Dentro da infinidade de compostos químicos sintetizados pelos seres vivos, os biocatalizadores vem sendo alvo de inúmeras pesquisas. As enzimas têm sido aplicadas com sucesso nos mais diversos processos industriais no ramo alimentício, na produção de bebidas, queijos, no ramo da medicina em diagnósticos, medicamentos, cosméticos, na síntese orgânica, no tratamento de efluentes, no tratamento de couro, na produção de biocombustíveis. Mesmo com todas as prospecções já realizadas estima-se que menos de 1% dos microrganismos são cultiváveis em laboratório, por isso novas prospecções com o intuito de descobrir biomoléculas diferentes ou linhagens com capacidades lipolíticas são relevantes, principalmente em países onde muito da tecnologia é vinda de outros países, como o Brasil. Outro fator que contribui para essa prospecção é a exploração da biodiversidade nacional. Considerando o contexto acima, o presente estudo tem como objetivo identificar e fazer uma caracterização parcial molecular de linhagens de fungos produtores de lipase, isolados de diversos substratos. Uma primeira seleção foi realizada com um teste qualitativo envolvendo substrato rodamina B. Dessa triagem inicial sete isolados se destacaram. Um deles não desenvolveu esporulação em meio V8. Dessa forma a atividade lipolítica de seis isolados foi determinada através da capacidade de hidrolisar o substrato p-nitrofenilpalmitato (p-NPP). O isolado OFS 11 demostrou a maior atividade lipolítica. Deste realizou-se à amplificação da região espaçadora transcrita interna (ITS) pelos iniciadores ITS1 (direto) e ITS4 (reverso), enviado para realização de sequenciamento em empresa terceira. Após o tratamento das sequências de nucleotídeos com o resultado proveniente do sequenciamento foram executado alinhamento via Blastn. Os resultados desses alinhamentos apontaram mais de 99% de homologia com fungos do gênero Penicillium. Porém a identificação a nível de espécie ainda apresentou imprecisões mais precisamente entre Penicillium steckii e citrinum. Deste modo ainda são necessários ensaios envolvendo outras regiões conservadas como a β-tubulina, Calmodulina e EF1 alpha. A partir dos resultados obtidos frente a atividade lipolítica outra linha de pesquisa foi desenvolvida a qual compreende a definição das condições ótimas de cultivo objetivando a caracterização da enzima produzida.